নিওস্টিগমাইন মিথাইলসালফেট ইনজেকশনের মাধ্যমে শিরায় (IV), পেশীতে (IM) বা ত্বকের নিচে (SC) প্রয়োগ করা হয় এবং এর মাত্রা রোগীর ক্লিনিকাল অবস্থা ও ওজনের ওপর ভিত্তি করে নির্ধারিত হয়। নন-ডিপোলারাইজিং নিউরোমাসকুলার ব্লকেড রিভার্সাল বা কার্যকারিতা কমানোর জন্য, এটি অন্তত এক মিনিট ধরে ধীরে ধীরে শিরার মাধ্যমে ০.০৩ থেকে ০.০৭ মিগ্রা/কেজি হিসেবে সর্বোচ্চ ৫ মিগ্রা পর্যন্ত দেওয়া হয়। মায়াস্থেনিয়া গ্রাভিসের চিকিৎসায়, এটি ত্বকের নিচে বা পেশীতে ০.৫ থেকে ২.৫ মিগ্রা মাত্রায় সারাদিন বিভিন্ন বিরতিতে দেওয়া হয়, নবজাতকদের ক্ষেত্রে অনেক সময় খাবারের ৩০ মিনিট আগে এটি দেওয়া হয়। অস্ত্রোপচার পরবর্তী প্রস্রাব আটকে যাওয়া বা অন্ত্রের শিথিলতা প্রতিরোধ বা চিকিৎসায় ০.২৫ থেকে ০.৫ মিগ্রা প্রতি ৩ থেকে ৬ ঘণ্টা অন্তর পেশীতে বা ত্বকের নিচে দেওয়া হয়। নিওস্টিগমাইনের কারণে হওয়া ব্র্যাডিকার্ডিয়ার মতো মাসকারিনিক পার্শ্বপ্রতিক্রিয়াগুলো মোকাবিলার জন্য নিওস্টিগমাইন দেওয়ার আগে বা সাথে অ্যাট্রোপিন বা গ্লাইকোপাইরোলেটের মতো অ্যান্টিকোলিনার্জিক ওষুধ অবশ্যই হাতের কাছে রাখতে হবে। বৃক্কের বা কিডনির সমস্যা থাকলে ডোজ কমানো প্রয়োজন; ক্রিয়েটিনিন ক্লিয়ারেন্স ১০ থেকে ৫০ মিলি/মিনিট হলে স্বাভাবিক ডোজের ৫০% এবং ১০ মিলি/মিনিটের নিচে হলে ২৫% ডোজ দেওয়ার সুপারিশ করা হয়।